昨日，中國疾控中心病毒病所國家流感中心實驗室，工作人員正在提取病毒標本中的核酸液。

工作人員正在分析病毒標本。

　　                                        對甲型H1N1檢測結(jié)果起至關重要作用的凝膠成像分析系統(tǒng)ZF-258型
      
      對于疑似甲型H1N1流感患者，通過何種手段才能終確診其感染了甲型H1N1流感病毒？

　　昨日下午，北京市宣武區(qū)迎新街100號，記者實地探訪了中國疾控中心病毒病所國家流感中心實驗室，工作人員再現(xiàn)了如何從疑似患者呼吸道內(nèi)獲取標本并分離出病毒的基本片段，再通過特殊儀器下讀出病毒的基因序列，終與甲型H1N1流感病毒的基因序列圖進行比照，從而得出患者是否染疫的全過程。

　　1　運送

　　4℃恒溫運送病毒標本

　　地點：醫(yī)院至流感網(wǎng)絡實驗室

　　用于追索病毒的標本來自疑似患者的呼吸道，一般是液體，即喉液或鼻液。每份液體標本需求量為200微克以上。

　　據(jù)國家流感實驗室工作人員李曉丹介紹，只有足夠的標本量，才能保證分離到足夠的活病毒和用于核酸檢測的病毒基因片段。

　　為了保證病毒的活性，每份標本從患者的鼻部或咽部取出后，必須立即裝進防漏、防爆、防雨的特殊密閉容器中。

　　李曉丹說，容器內(nèi)，要保證4攝氏度的恒溫，“就像冰箱冷藏室”，一直從醫(yī)院堅持到實驗室。之后，經(jīng)專人送進重重機關的P3實驗室（生物防護三級實驗室）。上海嘉鵬產(chǎn)凝膠成像儀對檢測甲型H1N1至關重要hongxin86.cn

　　2　提取

　　提取病毒分裝基因片段

　　地點：生物防護三級實驗室

　　P3實驗室曾經(jīng)不止一次在抗擊SARS和禽流感的戰(zhàn)斗中嶄露頭角。防控流感大流行，及時發(fā)現(xiàn)甲型H1N1流感病毒的蹤跡，P3實驗室內(nèi)的工作，仍是基礎和關鍵。

　　只有取得特定資格的工作人員，才能打開密碼鎖，進入P3實驗室。

　　工作人員需依次穿過一更衣室、二更衣室、緩沖間和準備間4個房間，終從頭武裝到腳。在裝戴好頭套、連衣褲的隔離服，口罩和腳套后，才能進入實驗室開始工作。

　　隨著深入，氣壓也一層層降了下來，實驗室里的氣壓就只有50-60帕左右（比正常氣壓低很多）。只有這樣，才能保證里面的風不會往外吹，里面的微生物和病毒，不會跑到實驗室外。

　　據(jù)李曉丹介紹，檢測甲型H1N1流感病毒的工作，將從兩方面同時開展：標本的一部分用于提取活病毒，留待培養(yǎng)研究。另一部分，則用于分離出病毒中的核酸液，也就是“飽含基因代碼的片段”，需要50微克以上，分裝入試管后，以備進一步的檢測。上海嘉鵬產(chǎn)凝膠成像儀對檢測甲型H1N1至關重要hongxin86.cn

　　3　檢測

　　擴展基因代碼方便對比

　　地點：生物防護二級實驗室（PCR實驗室）

　　試管中的基因片段隨后將送進PCR實驗室。

　　李曉丹說，PCR儀是核酸檢測病毒的關鍵設備。近幾天，他們針對甲型H1N1流感開發(fā)的檢測試劑盒，就將在這個環(huán)節(jié)發(fā)揮主要作用。

　　實驗人員將試管內(nèi)的一組基因片段放入檢測試劑配置的反應液中，再置于PCR儀下，大概兩個半小時左右，每個基因片段都被放大，生成了大小不一的核酸擴展物CDNA（基因片段擴展物）。

　　同時，另一部分通過反應液，被分裝在PCR小試管內(nèi)的核酸RNA（核糖核酸），則可以在特制模板中，通過與目標病毒基因片段的定時定量比對，由實驗人員讀出結(jié)果：是否為甲型H1N1流感病毒。

　　李曉丹說，為了確保檢測結(jié)果的準確無誤差，這個定時定量PCR檢測結(jié)果，只作為整個甲型H1N1流感病毒追索結(jié)論的一個參考。
       上海嘉鵬產(chǎn)凝膠成像儀對檢測甲型H1N1至關重要hongxin86.cn

　　4　確診

　　電泳膠內(nèi)篩顯病毒“原形”

　　地點：生物防護實驗室（綜合實驗室）

　　裝有不同基因片段擴展物的微小試管被送進綜合實驗室，這里的關鍵設備是盛滿了瓊脂糖凝膠、兩頭插著正負電極的矩形電泳檢測儀。

　　利用移液器，實驗人員將試管中微量的無色透明液體染色后，再放入充了電的膠“池”。

　　在電壓牽引推動下，膠池的表面開始密集冒起小氣泡，“那是病毒的基因擴展物在向另一個方向走，個頭大的產(chǎn)物走得慢，越是個頭小的產(chǎn)物走得越快?！崩顣缘ふf，瓊脂糖凝膠電泳儀就像一面篩子，把病毒中每個基因片段都以特定的“大”、“小”影像顯現(xiàn)出來。

　　當然，上述景象人的肉眼無法看到。實驗人員讓“膠池”充電40分鐘，確保所有的擴展物都“運動”起來后，將“膠池”放進另一個特制的方形“鐵柜”中，這其實是一部紫外線下工作的“照相機”———凝膠成像儀（上海嘉鵬產(chǎn)）。

　　成像儀內(nèi)，紫外線燈發(fā)光，照射在凝膠上，然后對膠中染色發(fā)光的擴展物自動拍照，并輸出在連接的電腦屏幕上。

　　李曉丹介紹，電腦中還能同時調(diào)出甲型H1N1流感病毒基因序列圖，在同一個位置上，受檢病毒的數(shù)個基因片段擴展物大小與參照物完全相合，就能夠終判斷，標本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒。

　　反之，排除感染可能。

　　李曉丹說，從病毒標本送至實驗室到終檢測出結(jié)果，約需4—6小時。

　　甲型H1N1病毒檢測程序

　　醫(yī)生對疑似患者的鼻液或喉液取樣

　　送入流感網(wǎng)絡實驗室

　　提取多個基因片段，對逐個基因片段進行擴展（放大）

　　擴展物入膠染色，在紫外線燈下發(fā)光成像

　　與電腦中儲存的目標病毒基因片段對比，同一位置上，大小是否完全一致

　　若一致則能夠終判斷，標本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒
      上海嘉鵬產(chǎn)凝膠成像儀對檢測甲型H1N1至關重要hongxin86.cn